Инструкция По Применению Набора Реагентов Андростендиона Методом Иммуноферментного Анализа

Инструкция По Применению Набора Реагентов Андростендиона Методом Иммуноферментного Анализа

Подобны тем, что синтезируются в гонадах; это дегидроэпиандростерон сульфат, D4- андростендион, дегидроэпиандростерон и некото- крови человека методом твердофазного иммунофер-. Набор реагентов « ИФА - пролактин» предназначен для. нию Российской Федерации является применение.

Встроенная проточная кювета для сокращения расхода реагента. •. Температурный андростендион, Обеспечение работы всех методов измерений и расчетов ИФА. Проверочный набор для био-. измерительная линейка, инструкция. Применение аргоновой плазмы позволяет в кратчайший срок.

ДРГ Эстрадиол ИФА 1. НАЗНАЧЕНИЕ. Набор реагентов предназначен для количественного определения эстрадиола в сыворотке или плазме крови человека методом иммуноферментного анализа на твердофазном носителе. Эстрадиол (эстрадиол-17β; 1,3,5 (10)-эстратриен-3,17β-диол; E2) представляет собой стероидный гормон с молекулярным весом 272,4 дальтон, содержащий в своей структуре фенольное кольцо. Он является наиболее активным природным эстрогеном в системе циркуляции, как женщин, так и мужчин.

НАБОР КОРТИЗОЛ [125I]. RIA Принцип метода. Данный анализ основан на конкуренции. тестостерон,тестостерон, андростендион, Данный набор следует применять Все реагенты стабильны при данной методик. ( иммуноферментный анализ), по результатам которых были.

ДРГ Эстрадиол ИФА

ХЕМА СОДЕРЖАНИЕ 1. НАЗНАЧЕНИЕ \b 2. ПРИНЦИП РАБОТЫ НАБОРА \b 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ \b 4. СОСТАВ НАБОРА \b 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ \b 6. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ \b 7. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА \b 8. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА \b 9. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА \b 10. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ И НОРМЫ \b 11. ЛИТЕРАТУРА \b CONTENT 1. INTENDED USE \b 2. SUMMARY AND EXPLANATION \b 3. PRINCIPLE OF THE TEST \b 4. WARNINGS AND PRECAUTIONS \b 5. KIT COMPONENTS \b 6. SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE \b 7. TEST PROCEDURE \b 8. QUALITY CONTROL \b 9. CALCULATION OF RESULTS \b 10. EXPECTED VALUES \b 11. PERFORMANCE CHARACTERISTICS \b 12. LITERATURE \b 9 9 10 10 11 12 12 14 14 14 15 15 2 3 3 4 5 5 5 6 7 8 8 Инструкция составлена Руководителем службы клиентского сервиса ООО ½ХЕМА╗, к. б. н. Д. С. Кострикиным Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 1 K209I ½УТВЕРЖДЕНА╗ приказом Росздравнадзора № 4495-Пр/08 от 10 июня 2008 года КРД № 10619 от 13 марта 2008 года ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕСТОСТЕРОНА В CЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗ 1. НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗ предназначен для количествен– ного определения концентрации тестостерона в cыворотке (плазме) крови методом твердофазного иммуноферментного анализа. 1.2. Тестостерон – стероид с молекулярной массой 288.4 Да. Основным местом образования тестостерона в семенниках являются клетки Лейдига (интерстициальная ткань). У женщин тестостерон синтезируется в надпочечниках, а контроль за его продукцией осуществляет лютеинизирующий гормон. Тесто– стерон стимулирует развитие мужских половых органов и вторичных половых признаков. Секреция тестостерона имеет определенный циркадный ритм. Наивысший уровень гормона отмечается в 6 часов утра, наименьший – вá20 часов. У женщин продукция тестостерона зависит от фазы менструального цикла: максимальное образование гормона происходит в лютеиновой фазе и в период овуляции. При опухолях из клеток Лейдига избыток тестостерона вызывает у мальчиков симптом ½младенца-Геракла╗. Повышенная концентрация тестостерона в плазме служит определяющим фактором маскулинизации у женщин. У девочек избыток тестостерона в организме всегда является следствием нарушения функции надпочечников, а у женщин может быть связан также с заболеваниями яичников. При этом может прекратиться овуляция иáпроявится типичное для мужчин строе– ние тела. Недостаточность тестостерона у мужчин ведет к развитию женского типа телосложения. При этом у мальчиков наблюдается недоразвитие половых органов. В целях дифференциальной диагностики первичного и вторичного гипогонадизма концентрацию тестостерона необходимо определять в комплексе с исследованиями ЛГ и ФСГ. Повышенные уровни тестостерона отмечаются при: синдроме Штейна-Левенталя; у мужчин с кариотипом XYY; преждевременном созревании у мальчиков; опухолях коры надпочечников; приеме лекарственных препаратов (барбитуратов, кломифена, эстрогенов, гонадотропина, пероральных контрацептивов); идиопатическом гирсутизме.Снижение уровня тестостерона отмечается при уремии; миотонической дистрофии; печеночной недостаточности; синдроме Клайнфелтера; крипторхизме; первичном и вторичном гипогонадизме; синдроме Каллмана; приеме андрогенов, дексаметазона, дигоксина, этанола, галотана. Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 2 ХЕМА 2. ПРИНЦИП РАБОТЫ НАБОРА Определение тестостерона основано на использовании конкурентного иммуноферментного анализа. На внутренней поверхности лунок планшета иммо– билизованы мышиные моноклональные антитела к тестостерону. Тестостерон из образца конкурирует c конъюгированным тестостероном за связывание сáантителами на поверхности лунки. В результате образуется связанный сáпла– стиком ½сэндвич╗, содержащий пероксидазу. Во время инкубации сá раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) происходит окрашивание растворов в лунках. Интенсивность окраски обратно пропорциональна концентрации тестостерона в исследуемом образце. Концентрацию тестостерона в исследуемых образцах определяют по калибровочному графику зависимости оптической плотности от содержания тестостерона в калибровочных пробах. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1. Специфичность. Перекрестная реакция мышиных моноклональных антител к тестостерону с другими аналитами приведена в таблице: Аналит Тестостерон 5-альфа-дегидротестостерон Андростендиол Андростендион Андростерон Дегидроэпиандростерон Прогестерон Эстрадиол, эстриол Кортизол, прегненолон Перекрестная реакция, % 100 16 1,0 0,4 <0,1 <0,1 <0,1 <0,01 <0,01 3.2. Воспроизводимость. Коэффициент вариации результатов определения содержания тестостерона в одном и том же образце cыворотки (плазмы) крови с использованием Набора ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗ не превышает 8,0%. 3.3. Линейность. Зависимость концентрации тестостерона в образцах cыворотки (плазмы) крови при разведении их cывороткой (плазмой) крови, не содержащей тестостерон, имеет линейный характер в диапазоне концентраций 1,0–40 нмоль/л и составляет ▒10,0%. 3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на ½открытие╗ – соответствие измеренной концентрации тестостерона предписанной, полученной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы 5 нмоль/л. Процент ½открытия╗ составляет 90–110%. 3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая Набором ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗ концентрация тестостерона в cыворотке (плазме) крови не превышает 0.3áнмоль/л. Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 3 4. СОСТАВ НАБОРА Наименование 1 6 шт. Кол-во Ед. Описание K209I á Код компонента Символ 1 P209Z Калибровочные пробы на основе сыворотки крови человека, содержащие известные количества тестостерона – 0; 1; 3; 10; 30; 100 нмоль/л, готовы к использованию (по 0.8 мл каждая) 2 шт. SORB MTP Планшет 96-луночный полистироловый, стрипированный, готов к использованию Document: K209I 2 C209Z CAL 1–6 шт. прозрачные жидкости синего цвета (калибровочная проба 0 – прозрачная бесцветная жидкость) прозрачная жидкость пурпурного цвета и прозрачная жидкость пурпурного цвета шт. шт. прозрачная жидкость зеленого цвета 3 Q209Z CONTROL Контрольные сыворотки на основе CONTROL 2 сыворотки крови человека с известным содержанием тестостерона, готовы к использованию (0.8 мл) 1 1 1 1 2 1 1 4 T209Z CONJ HRP Конъюгат, готов к использованию (11 мл) Instruction version: 010\b 4 Стоп-реагент, готов к использованию (11 мл) Бумага для заклеивания планшета Инструкция по применению Набора реагентов ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗ Паспорт контроля качества Набора реагентов ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗ 5 R055Z SUBS TMB Раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ), готов к использованию (11 мл) прозрачная бесцветная жидкость шт. шт. шт. шт. шт. прозрачная бесцветная жидкость прозрачная бесцветная жидкость - 6 S008Z BUF WASH Концентрат отмывочного раствора, 21X 21х-кратный (22 мл) 7 R050Z STOP 8 N003 - 9 K209I - Format version: 010 10 K209Q - ХЕМА 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 5.1. Потенциальный риск применения Набора – класс 2a (ГОСТ Р 51609-2000). 5.2. Все компоненты Набора, за исключением стоп-реагента (5,0% раствор серной кислоты), в используемых концентрациях являются нетоксичными. Раствор серной кислоты обладает раздражающим действием. Избегать разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. При попадании на кожу и слизистые пораженный участок следует промыть большим количеством проточной воды. 5.3. При работе с Набором следует соблюдать ½Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарноэпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР╗ (Москва, 1981 г.). 5.4. При работе с Набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированный материал, способный длительное время сохранять иá передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции. 6. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность содержимого лунок планшета при длине волны 450 нм; термостат, поддерживающий температуру +37 ░C ▒0,1 ░C; дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы вáдиапазоне 25–250 мкл; цилиндр мерный вместимостью 500 мл; вода дистиллированная; перчатки резиновые или пластиковые; бумага фильтровальная. –– –– –– –– –– –– –– 7. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА 7.1. Перед проведением анализа компоненты Набора и исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови следует выдержать при комнатной температуре (+18…+25 ░C) не менее 30 мин. 7.2. Приготовление планшета. Вскрыть пакет с планшетом и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся неиспользованными стрипы, чтобы предотвратить воздействие на них влаги, тщательно заклеить бумагой для заклеивания планшета и хранить при температуре +2…+8 ░C в течение всего срока годности Набора. 7.3. Приготовление отмывочного раствора. Содержимое флакона с концентратом отмывочного раствора (22 мл), перенести в мерный цилиндр вместимостью 500 мл, добавить 440 мл дистиллированной воды и тщательно перемешать. В случае дробного использования Набора следует отобрать необходимое количество концентрата отмывочного раствора и развести дистиллированной водой в 21 раз (1 мл концентрата отмывочного раствора + 20 мл дистиллированной воды). Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 5 K209I 8. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 8.1. Набор реагентов ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗ должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2…+8 ░С в течение всего срока годности, указанного на упаковке Набора. Допускается хранение (транспортировка) Набора при температуре до +25 ░С неáболее 5 суток. Не допускается замораживание целого набора. Допускается однократное замораживание (-20 ░C) калибровочных проб и контрольной сыворотки в аликвотах. 8.2. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 исследуемых образцов, 6 калибровочных проб и 2 пробы контрольной сыворотки (всего 96áопределений). 8.3. В случае дробного использования Набора компоненты следует хранить следующим образом: –– оставшиеся неиспользованными стрипы необходимо тщательно заклеить бумагой для заклеивания планшета и хранить при температуре +2…+8 ░C вáтечение всего срока годности Набора; –– конъюгат, субстрат, стоп-реагент после вскрытия флаконов следует хранить при температуре +2…+8 ░С в течение всего срока годности Набора; –– калибровочные пробы и контрольную сыворотку после вскрытия флаконов следует хранить при температуре +2…+8 ░C не более 2 месяцев; –– оставшийся неиспользованным концентрат отмывочного раствора следует хранить при температуре +2…+8 ░C в течение всего срока годности Набора; –– приготовленный отмывочный раствор следует хранить при комнатной температуре (+18…+25 ░C) не более 5 суток или при температуре +2…+8 ░C не более 30 суток; Примечание. После использования реагента немедленно закрывайте крышку флакона. Закрывайте каждый флакон своей крышкой. 8.4. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную, мутную сыворотку (плазму) крови, а также сыворотку (плазму) крови, содержащую азид натрия. Если анализ производится не в день взятия крови, сыворотку (плазму) следует хранить при температуре -20 ░C. Повторное замораживание-оттаивание образцов сыворотки (плазмы) крови не допускается. 8.5. Исключается использование для анализа образцов сыворотки (плазмы) крови людей, получавших в целях диагностики или терапии препараты, в состав которых входят мышиные антитела. 8.6. При использовании Набора для проведения нескольких независимых серий анализов следует иметь в виду, что для каждого независимого определения необходимо построение нового калибровочного графика; кроме этого, реко– мендуется определение концентрации тестостерона в контрольной сыворотке. 8.7. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению Набора. Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 6 9. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 1 Поместите в рамку необходимое количество стрипов – исследуемые образцы в 2 повторах и 16 лунок для калибровочных проб и контрольной сыворотки. Document: K209I 2 Внесите в соответствующие лунки в дубликатах по 25 мкл калибровочной пробы и контрольной сыворотки. В остальные лунки внесите в дубликатах по 25 мкл исследуемых образцов cыворотки (плазмы) крови. Внесение калибровочных проб, контрольной сыворотки и исследуемых образцов необходимо произвести в течение 5–10 минут. 3 Внесите во все лунки по 100 мкл конъюгата. 4 Заклейте планшет бумагой для заклеивания планшета и инкубируйте его вá течение 120 минут при температуре +37 ░C. 5 По окончании инкубации удалите содержимое лунок и отмойте лунки 5 раз. При каждой отмывке добавьте во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора (см.áп.á7.3), встряхните планшет круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией или декантированием. Задержка при отмывке (замачивание лунок) не требуется. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием планшета в перевернутом положении по фильтровальной бумаге. 6 Instruction version: 010\b 7 Внесите во все лунки по 100 мкл раствора субстрата тетраметилбензидина. Внесение раствора субстрата тетраметилбензидина в лунки необходимо произвести в течение 2–3 мин. Инкубируйте планшет в темноте при комнатной температуре (+18…+25░С) в течение 10–20 минут в зависимости от степени развития синего окрашивания. 7 Внесите во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор субстрата тетраметилбензидина, по 100 мкл стоп-реагента, при этом содержимое лунок окрашивается в яркожелтый цвет. 8 Измерьте величину оптической плотности (ОП) содержимого лунок планшета на фотометре вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Измерение ОП содержимого лунок планшета необходимо произвести в течение 15 мин после внесения стоп-реагента. Бланк фотометра выставляйте по воздуху. 9 Постройте в полулогарифмических координатах калибровочный график: ось абсцисс (х) – десятичный логарифм концентрации тестостерона в калибровочных пробах (нмоль/л), ось ординат (у) – оптическая плотность калибровочных проб (ОП 450 нм). Для алгоритма обсчета (аппроксимации) калибровочного графика используйте интервальный (кусочно-линейный, ½от точки к точке╗) метод. Приравняйте концентрацию калибровочной пробы 0 нмоль/л к несущественно малой величине, например, 0.001 нмоль/л Format version: 010 10 Определите по калибровочному графику содержание тестостерона в исследуемых образцах. ХЕМА K209I 10. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ И НОРМЫ 10.1. Основываясь на результатах исследований, проведенных ООО ½ХЕМА╗, рекомендуем пользоваться нормами, приведенными ниже. Вместе сáтем, в соответ– ствии с правилами GLP (Хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить параметры нормы, характерные для обследуемой популяции. Примечание. Значения концентраций тестостерона в исследуемых образцах, находящиеся ниже границы чувствительности Набора (0.3 нмоль/л), а также превышающие значение верхней калибровочной пробы (100 нмоль/л) следует приводить в следующей форме: в исследуемом образце Х концентрация тестостерона ниже 0.3 нмоль/л или выше 100 нмоль/л. 10.2. В Наборе ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗ значения концентраций калибровочных проб выражены в нмоль/л. Для пересчета концентраций в нг/мл, полученное значение концентрации в нмоль/л следует умножить на 0.29. 1 нмоль/л = 0.29 нг/мл Исследуемая группа 20-39 лет 40-55 лет старше 55 лет Женщины Единицы, нмоль/л Нижний предел Верхний предел Мужчины 9.0 38 6.9 21 5.9 18.1 4.6 11. ЛИТЕРАТУРА 1. Tietz, N.W. Textbook of Clinical Chemistry. Saunders, 1986. 2. Joshi, U. M., et al. Steroids 34 (1) 35 (1979) 3. Turkes, A., et al. J Endocrinol. 81 (2) P165 (1979) 4. Ismail, A. A., Niswender, G. D. Midgley, A. R. J. Clin. Endocr. Metab. 34, 177 – 184 (1972) 5. Rajkowski,K. M.,Cittanova N.,Desfosses, B.and Jayle, M.F. Steroids 29 no 5 1977 6. Widsdom G. B. Clin. Chem. 22/8, 1243 – 1255 (1976) Единицы доп., нг/мл Нижний предел Верхний предел 2.6 2.0 1.7 11 6.1 5.2 1.3 По вопросам, касающимся качества Набора ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗, следует обращаться в ООО ½ХЕМА╗ по адресу: 105043, Москва, а/я 58, тел./факс: (495) 737-39-36, 737-00-40, 510-57-07 (многоканальный) электронная почта: info@xema.ru; rqc@xema.ru интернет: www.xema.ru; www.xema-medica.com Руководитель службы клиентского сервиса ООО ½ХЕМА╗, к. б. н. Д. С. Кострикин Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 8 ХЕМА Instruction for use A SOLID-PHASE ENZYME IMMUNOASSAY FOR THE QUANTITATIVE DETERMINATION OF TESTOSTERONE IN HUMAN BLOOD SERUM OR PLASMA 1. INTENDED USE A solid-phase enzyme immunoassay for the quantitative determination ofátestosterone in blood serum or plasma. This kit is designed for measurement of testosterone in blood serum or plasma. For possibility of use with other sample types, please, refer to Application Notes (on request). The kit contains reagents sufficient for 96 determinations and allows to analyze 40 unknown samples in duplicates. 2. SUMMARY AND EXPLANATION Testosterone is a steroid with a MW of 288.4 Dalton. The main sites of testosterone secretion are Leidig cells in interstitial tissue of testicles in men. In women testosterone is secreted in the adrenals and is controlled by luteinizing hormone. Testosterone stimulates development of male genital organs and formation of secondary sexual features. In males, Testosterone secretion undergoes circadian rhythms with maximal concentrations seen in the morning (6 am) and minimal – in the evening (8 pm). In females, Testosterone secretion is regulated by menstrual cycle with maximal levels found in luteinic phase and during ovulation. Leidig cell tumours producing high levels of serum testosterone in young boys lead to development of “little Hercules” syndrome. Elevated testosterone level in women causes the clinical signs of masculinization. In men, decreased Testosterone levels may lead to female habitus oráunderdevelopment of male genital organs in boys. To differentiate between primary and secondary hypogonadism, Testosterone should be assayed in conjunction with LH and FSH. Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 9 K209I 3. PRINCIPLE OF THE TEST This test is based on competition enzyme immunoassay principle. Tested specimen is placed into the microwells coated by specific murine monoclonal to testosteroneantibodies simultaneously with conjugated Testosterone-peroxidase. Testosterone from the specimen competes with the conjugated Testosterone for coating antibodies. After washing procedure, the remaining enzymatic activity bound to the microwell surface is detected and quantified by addition of chromogen-substrate mixture, stop solution and photometry at 450 nm. Optical density in the microwell is inversely related to the quantity of the measured analyte in the specimen. 4. WARNINGS AND PRECAUTIONS 4.1. For professional use only. 4.2. This kit is intended for in vitro diagnostic use only. 4.3. INFECTION HAZARD: There is no available test methods that can absolutely assure that Hepatitis B and C viruses, HIV-1/2, or other infectious agents are not present inátheáreagents of this kit. All human products, including patient samples, should be considered potentially infectious. Handling and disposal should be in accordance with theá procedures defined by aná appropriate national biohazard safety guidelines oráregulations. 4.4. Avoid contact with stop solution containing 5,0% H2SO4. It may cause skin irritation and burns. 4.5. Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents. Microbial contamination of reagents may give false results. 4.6. Do not use the kit beyond the expiration date. 4.7. All indicated volumes have to be performed according to the protocol. Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microplate readers. 4.8. Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled. 4.9. Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guidelines or regulations. 4.10. Do not mix reagents from different lots. 4.11. Replace caps on reagents immediately. Do not swap caps. 4.12. Do not pipette reagents by mouth. 4.13. Specimens must not contain any AZIDE compounds – they inhibit activity ofáperoxidase. 4.14. Safety Data Sheet for this product is available upon request directly from XEMA Co., Ltd. 4.15. The Safety Data Sheet fit the requirements of EU Guideline 91/155 EC. Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 10 5. KIT COMPONENTS Units Description Qty 1 pcs á blue (C1 – colourless) 2 months until exp.date 6 pcs 5.1. Contents of the Kit Colour code Stability of opened/ diluted components á Symbol 1 SORB MTP human testosterone diluted in a preselected human serum preservative – 0,01% Bronidox L, 0,01% 2-Methyl-4-isothiazolin-3-onehydrochloride; also contains blue dye purple and purple green Testosterone EIA polystyrene microwells coated with murine strips, monoclonal to testosterone 8х12 wells Document: K209I 2 CAL 1–6 Calibrator set, 0.8 ml each. The set contains 6 calibrators: 0; 1; 3; 10; 30, 100 nmol/l 3 CONTROL Control sera CONTROL 2 (0.8 ml) 2 months 4 CONJ HRP Conjugate, 11 ml until exp.date Instruction version: 010\b 11 5,0% vol/vol solution of sulphuric acid á 5 SUBS TMB Substrate solution, 11 ml 2 pcs dilution of preselected human serum, with high content of testosterone with preservative – 0,01% Bronidox L, 0,01% 2-Methyl-4-isothiazolin-3-onehydrochloride; also contains purple dye 1 pcs aqueous solution of testosterone coupled with horseradish peroxidase diluted on phosphate buffered solution preservative – 0,01% Bronidox L, 0,01% 2-Methyl-4-isothiazolin-3-onehydrochloride and green dye 1 pcs ready-to-use single-component tetramethylbenzidine (TMB) solution. colourless colourless until exp.date Concentrate – until exp.date Diluted washing solution – 1 month at 2…+8 ░C or 5 days at RT 6 BUF WASH 21X Washing solution aqueous solution of sodium chloride and detergent 1 pcs concentrate 21x, (Tween 20), contains proClin300 as a preservative 22 ml 7 STOP Stop solution, 11 ml 1 pcs 2 pcs 1 pcs 1 pcs colourless á á á until exp.date N/A N/A N/A 8 N003 Plate sealing tape 9 K209I Instruction á Testosterone EIA ХЕМА Format version: 010 10 K209Q QC data sheet á Testosterone EIA K209I 5.2. Equipment and material required but not provided –– Distilled or deionized water; –– Automatic or semiautomatic multichannel micropipettes, 100–250 Ál, is useful but not essential; –– Calibrated micropipettes with variable volume, range volume 25–250 Ál; –– Dry thermostat for 37 ░С ▒0,1 ░С; –– Calibrated microplate photometer with 450 nm wavelength and OD measuring range 0–3.0. 5.3. Storage and stability of the Kit Store the whole kit at +2…+8 ░C upon receipt until the expiration date. After opening the pouch keep unused microtiter wells TIGHTLY SEALED BYáADHESIVE TAPE (INCLUDED) to minimize exposure to moisture. 6. SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE This kit is intended for use with serum or plasma (ACD- or heparinized). Grossly hemolytic, lipemic, or turbid samples should be avoided. Specimens may be stored for up to 48 hours at +2…+8 ░C before testing. For a longer storage, the specimens should be frozen at -20 ░C or lower. Repeated freezing/ thawing should be avoided. 7. TEST PROCEDURE 7.1. Reagent Preparation –– All reagents (including unsealed microstrips) should be allowed to reach room temperature (+18…+25 ░C) before use. –– All reagents should be mixed by gentle inversion or vortexing prior to use. Avoid foam formation. –– It is recommended to spin down shortly the tubes with calibrators on low speed centrifuge. –– Prepare washing solution from the concentrate BUF WASH 21X by 21 dilutions inádistilled water. 7.2. Procedural Note: It is recommended that pipetting of all calibrators and samples should be completed within 3 minutes. See the example of calibration graphic in Quality Control data sheet. 7.3. Alternative units: 1 nmol/l = 0.29 ng/ml Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 12 7.4. Assay procedure 1 Put the desired number of microstrips into the frame; allocate 16 wells for the calibrators CAL 1–6 and control samples CONTROL, CONTROL 2 and two wells for each unknown sample. DO NOT REMOVE ADHESIVE SEALING TAPE FROM UNUSED STRIPS. Document: K209I 2 Pipet 25 Ál of calibrators CAL 1–6, control samples CONTROL, CONTROL 2 and unknown samples into the wells 3 Dispense 100 Ál of CONJ HRP into the wells. Cover the wells by plate adhesive tape (included into the kit). 4 Incubate 120 minutes at 37 ░C. 5 Prepare washing solution by 21x dilution of washing solution concentrate (BUF WASH 21X) by distilled water. Wash the strips 5 times. 6 Dispense 100 Ál of SUBS TMB into the wells 7 Incubate 10–20 minutes at +18…+25 ░C 8 Dispense 100 Ál of STOP into the wells. Instruction version: 010\b 13 9 Measure OD (optical density) at 450 nm. 10 Set photometer blank on air 11 Apply lin-log method for data reduction. 7.5.áHanding notes Сalibrators and control sample(s) – оnly one freezing/thawing cycle is allowed ХЕМА Format version: 010 K209I 8. QUALITY CONTROL It is recommended to use control samples according to state and federal regulations. The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results. The test must be performed exactly as per the manufacturer’s instructions for use. Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP (Good Laboratory Practice) or other applicable federal, state, and local standards and/or laws. This is especially relevant for the use of control reagents. It is important to always include, within the test procedure, a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test. The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications. 9. CALCULATION OF RESULTS 9.1. Calculate the mean absorbance values (OD450) for each pair of calibrators and samples. 9.2. Plot a calibration curve on graph paper: OD versus testosterone concentration. 9.3. Determine the corresponding concentration of testosterone in unknown samples from the calibration curve. Manual or computerized data reduction is applicable on this stage. Point-by-point or linear data reduction is recommended due to non-linear shape of curve. 9.4. Below is presented a typical example of a standard curve with the XEMA Co. Not for calculations! Calibrators CAL CAL CAL CAL CAL CAL 1 2 3 4 5 6 Value 0 nmol/l 1 nmol/l 3 nmol/l 10 nmol/l 30 nmol/l 100 nmol/l Absorbance Units (450 nm) x 1000 2030 1619 1282 1094 889 554 10. EXPECTED VALUES Therapeutical consequences should not be based on results of IVD methods alone – all available clinical and laboratory findings should be used by a physician to elaborate therapeutically measures. Each laboratory should establish its own normal range for Testosterone. Based on data obtained by XEMA, the following normal range is recommended (see below). NOTE: the patients that have received murine monoclonal antibodies for radioimaging or immunotherapy develop high titered antimouse antibodies (HAMA). The presence of these antibodies may cause false results in the present assay. Sera from HAMA positive patients should be treated with depleting adsorbents before assaying. Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 14 ХЕМА Units, nmol/l Lower limit Upper limit 9.0 6.9 5.9 38 21 18.1 4.6 Units alternative, ng/ml Lower limit Upper limit 2.6 2.0 1.7 11 6.1 5.2 1.3 Sex, age Males 20-39 yrs 40-55 yrs >55 yrs Females 11. PERFORMANCE CHARACTERISTICS 11.1. Analytical specificity / Cross reactivity Analyte Testosterone 5-alpha-dehydrotestosterone Androstendiol Androstendione Androsterone Dehydroepiandrosterone Progesterone Estradiol, Estriol Cortisol, Pregnenolone Cross-reactivity, % wt/wt 100 16 1,0 0,4 <0,1 <0,1 <0,1 <0,01 <0,01 11.2. Analytical sensitivity Sensitivity of the assay was assessed as being 0.3 nmol/l. 11.3. Linearity Linearity was checked by assaying dilution series of 5 samples with different testosterone concentrations. Linearity percentages obtained ranged within 90 to 110%. 11.4. Recovery Recovery was estimated by assaying 5 mixed samples with known testosterone concentrations. The recovery percentages ranged from 90 to 110%. 12. LITERATURE 1. Tietz, N. W. Textbook of Clinical Chemistry. Saunders, 1986. 2. Joshi, U. M., et al. Steroids 34 (1) 35 (1979) 3. Turkes, A., et al. J Endocrinol. 81 (2) P165 (1979) 4. Ismail, A. A., Niswender, G. D. Midgley, A. R. J. Clin. Endocr. Metab. 34, 177 – 184 (1972) 5. Rajkowski, K. M.,Cittanova N., Desfosses, B.and Jayle, M. F. Steroids 29 no 5 1977 6. Widsdom G. B. Clin. Chem. 22/8, 1243 – 1255 (1976) Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 15 K209I Document: K209I Instruction version: 010\b Format version: 010 16

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕСТОСТЕРОНА В CЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ ½ТЕСТОСТЕРОН-ИФА╗

• 1. 1. НАЗНАЧЕНИЕ. Набор реагентов предназначен для количественного определения эстрадиола в сыворотке или плазме крови человека методом иммуноферментного анализа на твердофазном носителе. Андростендион. 0. воды и использовать в соответствии с инструкцией по их применению. 8.
• Методом твердофазного иммуноферментного анализа. 1.2. Андростендион Инструкция по применению Набора реагентов « ТЕСТОСТЕРОН- ИФА ».
• В коре надпочечников (25%) и путем конверсии андростендиона (50%). Принцип метода (Производитель может вносить изменения в инструкцию по применению. За версией инструкции для конкретного лота диагностического набора / реагента обращайтесь в отдел продукции ЗАО " Аналитика").
• Меню тестов для иммуноферментного анализа для определения Андростендиона Eclectica(Eclectica Androstenedione Reagent Kit) Инструкция.